Practica no. 1 Medio de cultivo.

Práctica No. 1 Medio de cultivo.

Etapa preanalitica

El medio de cultivo es la combinación sólida o líquida de nutrientes y agua. Usualmente incluye sales inorgánicas, carbohidratos, vitaminas y aminoácidos. A menudo se denomina Medio Basal y puede ser suplementado con algún regulador de crecimiento y ocasionalmente con otras sustancias varias. Solución que cuenta con los nutrientes necesarios para recuperar, multiplicar, aislar e identificar los microorganismos (bajo condiciones favorables de temperatura y pH), así como efectuar pruebas de susceptibilidad. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados, al prepararse podemos encontrarlos en estado sólido, semisólido y líquido.

INVESTIGACION MEDIO DE CULTIVO.* Etapa Preanalítica

Los medios de cultivo en microbiología

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).

Etapa preanalitica.

(Apuntes- instrucciones.)

1. Objetivo realizado por el alumno

2. introducción

3. índice

4. materiales

5. instrucciones

1. Llegar puntualmente al laboratorio.

2. Disponer de equipo de bioseguridad para realizar trabajo de laboratorio. 5 min.

3. Solicitar vale para materiales y vestir mesa de laboratorio. con papel de color blanco para poder obtener un campo estéril. Un alumno de los que esta dentro del laboratorio. para realizar la practica debe de anotar en el pizarrón los materiales que se ocupan en la misma.

4. Materiales para medio de cultivo. Cristalería: Matraz Erlenmeyer 250ml, Vaso de Precipitado 250ml,Probeta Graduada 100ml, Vaso Precipitado 50ml. vidrio de reloj, varilla de cristal, espátula, balanza gran ataría, autoclave, mechero de bunsen o mechero de fisher, torundas de algodón secas, papel secante de color café, cinta masquen tape color café. En reactivos medios de cultivo.

5. Indicaciones para el desarrollo 1/2 cultivo. Pesar 1/2 cultivo utilizando el vidrio de reloj realizando regla de 3 solicitar al laboratorio agua destilada dependiendo la cantidad del producto que se valla a ocupar, en cajas petri siendo un total de 7 cajas petri por mesa.Una vez pesando el polvo de 1/2 cultivo se mezcla en el agua que se tiene en el vaso de precipitado. Para poder mezclar y que no queden gránulos se utiliza la varilla de cristal para agitar con forme las manecillas del reloj hasta que se disuelva el polvo en el agua. Una vez que ya tenemos la mezcla hecha dejamos reposar el producto de acuerdo a las indicaciones que contiene el deposito de medio de cultivo. NOTA: LAS INDICACIONES DEL 1/2 DE CULTIVO QUE CONTIENE LA ETIQUETA DEL DEPOSITO SE DEBEN TRANSCRIBIR PARA CONOCER BIEN LOS DATOS.

6. Se le da el nombre de re hidratar al polvo con el agua y observando las indicaciones dadas se tomara el % requerido de polvo para la mezcla con el agua que solicite de acuerdo con las cajas petri que se vallan a trabajar.

7. Después del reposo del producto se le da movimiento de rotación a juego de muñeca exponiendo al fuego del mechero, estos movimientos darán como resultado una ebullición y se le dará desde el momento que inicie la ebullición se le dará 1min de tiempo para que quede listo nuestro medio de cultivo de forma liquida. Se debe tener cuidado con la ebullición del producto en el matraz erlenmeyer ya que este puede rebasar sus limites y ocasionar un accidente por quemaduras. Una vez terminada la ebullición de 1/2 de cultivo se deja enfriar se tampone a con torundas de algodón se cubre con cinta masquen tape se etiqueta , nombre, medio , fecha, hora.

8. Todos los integrantes se pondrán de acuerdo para el proceso de esterilización se depositaran en el autoclave.

9. Técnica de esterilización .Se esterilizara el producto a 15lb de presión y 120° durante 20min. Una vez terminada la esterilización se deja enfriar el producto, se libera el autoclave se entrega a las mesas y será vaciado en cajas petri. Para el vaciado en cajas petri se requiere un campo de esterilización con 2 mecheros para que el producto este dentro del campo de esterilización.

10. Se utiliza vaso de precipitado 250ml, el cual se pasara para que este, este esterilizado se le vierte el producto en la cantidad requerida y se vacía en la caja petri dejándola abierta con la tapa sobre encimada hasta que enfríe este, será cada vez que sea llenado de cajas. 1/2 de cultivo se tapa , etiqueta y se deposita en el enfriador.

Conclusiones
Bibliografía
Glosario

Etapa analítica

INTRODUCCION

Un medio de cultivo es cualquier “medio” que proporcione sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos.

Estos pueden ser líquidos, sólidos o semisólidos. Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que en concentraciones adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

OBJETIVO

Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los medios de cultivo. Uno de los principales objetivos de esta práctica es el de conocer la elaboración de un medio de cultivo y llevarla a cabo. Así como también aplicar conocimientos anteriores.

En esta nuestra primera práctica en primer lugar solicitamos los materiales necesarios:

Medio de cultivo (polvo)

Matraz erlenmeyer de 250 ml.

Dos mecheros de bunsen

Papel blanco para vestir mesa de laboratorio

Papel secante.

Balanza granataria.

Espátula.

Agua destilada.

Autoclave.

leímos las instrucciones de la etiqueta del medio de cultivo, leímos indicaciones y como era cierta cantidad en 1 litro de agua decidimos hacerlo en una cantidad de agua que nosotros elegiríamos
Esta fue de 19 ml. Cada caja petri, en total eran 8 cajas petri. Utilizando regla de tres para poder sacar el medio de cultivo de cada caja petri.

Si para 1 litro de agua son -----------------à50 Gr de medio de cultivo. 133 ml. De agua (19x8 cajas) -------------à X

Se vertieron 133 ml. De agua y 6.65 gr. De medio de cultivo en un matraz de 250 ml. Lo disolvimos con la varilla de cristal hasta quitar grumos, por consiguiente se calentó en los mecheros de bunsen.

Llego a su punto de ebullición e hirvió por 1 minuto.

Se dejo reposar 15min. Después se tapo con torundas de algodón secas, papel secante y cinta masking tape.

Posteriormente se etiqueto con número de mesa,fecha, hora grupo.

Ya listo se metió en la autoclave previamente preparada a 120°C con 15 libras de presión. Durante 15 min. La autoclave se purgo, reposo durante 10 min. Y se abrió finalmente.

Con el vaso de precipitado de 50 ml.

Esterilizado de la boquilla con el mechero se midieron 19 ml. Que se vaciarían en cada una de las cajas petri que se dejaron reposar entre tapadas en el campo de esterilización con los dos mecheros aun lado prendidos.

Una ves que ya no saliera vapor de agua de las cajas estas son tapadas totalmente y etiquetadas juntas con todos los datos necesarios, y metidas a la estufa de incubación a 38 grados.

CONCLUSION

Etapa pos analítica.

En esta práctica se puede concluir que el alumno elaboro de manera correcta los medios antes mencionados y podrán ser utilizados en la próxima clase. En la cual se sembrara un microorganismo para poder conocer su crecimiento.